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MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式鑒定配色方案

更新時(shí)間:2017-11-17 點(diǎn)擊次數(shù):10287

MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式鑒定操作步驟

 

流程

準(zhǔn)備細(xì)胞——抗體染色——上機(jī)檢測(cè)

 

1、準(zhǔn)備細(xì)胞:取培養(yǎng)的細(xì)胞離心(300 g/5min),棄去上清, 加入一定量PBS洗滌一次,棄去上清,彈散細(xì)胞,細(xì)胞重懸到5×106~10×106之間。

 

2、MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式鑒定配色方案

取100 ml的細(xì)胞于EP管或流式管內(nèi),分三管染色。

*管 陽(yáng)性配色 Anti-human CD90 FITC, Anti human CD105 APC,Anti-human CD45 PE-Cy7各加5 ml。

第二管 陰性配色 Anti-human HLA-RA FITC, Anti-human CD34 PE-Cy7, Anti-human CD73 APC各加5 ml

第三管同型對(duì)照 Mouse IgG1 K Isotype Control FITC 0.6 ml,Mouse IgG1 Isotype Control PE-Cy7 1.2 ml,Mouse IgG1 Isotype Control APC 1.2 ml。

 

配色依據(jù):細(xì)胞治療協(xié)會(huì)間充質(zhì)和組織干細(xì)胞委員會(huì)2006年提出了MSC鑒定的zui低標(biāo)準(zhǔn),關(guān)于細(xì)胞表型的要求是表達(dá)CD90, CD105和CD73不表達(dá)CD45, CD34, CD14或CD11b, CD79a或CD19和HLA-DR;陽(yáng)性指標(biāo)都需要染色,陰性指標(biāo)一般選擇2-3個(gè)指標(biāo),因?yàn)槭亲黾?xì)胞表型鑒定,所以要配齊同型對(duì)照。

 

3、加入相應(yīng)的抗體后混勻,建議彈管子,盡量不用槍頭直接吹打,室溫避光孵育15 min,染色過(guò)程中再混勻一次。

4、染色完成后加入1 ml的PBS洗滌細(xì)胞,離心300 g/5min。

 

5、棄去上清,彈散細(xì)胞,加入500 ml PBS重懸,上機(jī)檢測(cè)。

注意:1、同型對(duì)照是根據(jù)染色抗體的用量來(lái)計(jì)算的,所以每種同型對(duì)照可能加入量可能不一樣(具體可看后文同型對(duì)照章節(jié)的介紹)。

   2、先上機(jī)檢測(cè)同型對(duì)照管,各檢測(cè)通道以這一管的信號(hào)設(shè)為陰性,在上機(jī)檢測(cè)抗體染色管。

   3、zui后結(jié)果的顯示用峰圖來(lái)表示,每種抗體的檢測(cè)結(jié)果都與對(duì)應(yīng)的同型對(duì)照染色結(jié)果疊加展示( overlay )。

 

MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式鑒定結(jié)果

 

 

注意:CD90表達(dá)量非常高,所以建議用FITC熒光染料,F(xiàn)ITC/PE-Cy7/APC這三種熒光染料之間幾乎沒(méi)有補(bǔ)償,所以這三種染料一起染色不需調(diào)節(jié)補(bǔ)償,如果是做臍帶干細(xì)胞的鑒定,CD105抗體選擇SN6克隆號(hào),其他克隆號(hào)染色結(jié)果不好(某些克隆號(hào)染不上)。

 

MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式配色抗體

 

品牌

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

價(jià)格

BioGems

03011-50

  Anti-Human CD90 (Thy-1) FITC

25 test/100 tests

25 test

1540元

BioGems

07111-77

  Anti-Human CD45 PE-Cy7

25 test/100 tests

25 test

1680元

BioGems

17111-80

  Anti-Human CD105 (Endoglin) APC

25 test/100 tests

25 test

2170元

BioGems

74111-50

  Anti-Human HLA-DR FITC

25 test/100 tests

25 test

1400元

BioGems

06411-77

  Anti-Human CD34 PE-Cy7

25 test/100 tests

25 test

2170元

BioGems

05811-80

  Anti-Human CD73 APC

25 test/100 tests

25 test

1960元

 

 

同型對(duì)照

總價(jià)

10920元

BioGems

44212-50

  Mouse IgG1 K Isotype Control  FITC

100 mg

1120元

BioGems

44212-77

  Mouse IgG1 Isotype Control  PE-Cy7

100 mg 

1890元

BioGems

44212-80

  Mouse IgG1 Isotype Control APC

100 mg

1750元

 

 

MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式鑒定配色方案由Biogems提供。Biogems是PeproTech的流式抗體品牌,質(zhì)高價(jià)惠,現(xiàn)正進(jìn)行一系列*活動(dòng)。

 

MSC人間充質(zhì)干細(xì)胞流式配色抗體產(chǎn)品由重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司授權(quán)代理,。重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司以“專(zhuān)注干細(xì)胞研究,提升干細(xì)胞品質(zhì)為發(fā)展理念,專(zhuān)業(yè)從事干細(xì)胞基礎(chǔ)研究、干細(xì)胞再生醫(yī)學(xué)臨床應(yīng)用研究及干細(xì)胞技術(shù)服務(wù)。

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