供應(yīng)商: | BD | 保存條件: | 4℃ | 品牌: | BD | 數(shù)量: | 大量 | 規(guī)格: | 100 t |
BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒 100T 產(chǎn)品簡介BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒zui經(jīng)典的一款 產(chǎn)品詳細(xì)信息BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒說明書 一、概述 在正常細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),細(xì)胞發(fā)生凋亡zui早期,膜磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè),這一變化早于細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)濃縮、DNA的片斷化和細(xì)胞膜的通透性增加等凋亡現(xiàn)象。AnnexinV是一種磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此AnnexinV被作為檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細(xì)胞膜,但凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞由于細(xì)胞膜通透性的增加,PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用,就可以將處于不同凋亡時期的細(xì)胞區(qū)分開來。
二、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒的組份:
Product code Description 556547 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit I Components: 556547a Annexin V Binding Buffer, 10X conc (51-66121E 556547b Annexin V-FITC (51-65874X) 556547c Propidium Iodide Staining Solution(51-66211E)
三、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒的操作步驟 : 貼壁細(xì)胞需用0.25%的胰酶消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時可加2%的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的胰酶消化時,注意必須*清除EDTA:在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌,清除EDTA,以免殘余的EDTA與Ca2+螯合,影響Annexin V的結(jié)合。 (1)用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer; (2)細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集:離心5分鐘;貼壁細(xì)胞:用不含EDTA的胰酶消化收集后(注:胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞膜上磷脂酰絲氨酸與Annexin V-FITC的結(jié)合),于室溫2000rpm離心5~10分鐘,收集細(xì)胞; (3)細(xì)胞洗滌:用預(yù)冷1×PBS(4℃)重懸細(xì)胞一次,2000rpm離心5~10分鐘,洗滌細(xì)胞; (4)加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞; (5)Annexin V-FITC標(biāo)記:加入5μL的Annexin V-FITC混勻后,避光,室溫孵育15分鐘; (6)PI標(biāo)記:上機前5分鐘再加入5μL的PI染色。 (7)上機前,補加200μL的1×Binding Buffer。
四、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒的保存: 4℃保存,兩個月內(nèi)可保持穩(wěn)定;避免反復(fù)凍融。
五、BD 556547 AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡雙染試劑盒的注意事項 : (1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測; (2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套; (3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察; (4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。 (5)在細(xì)胞洗滌的zui后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。 (6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。 (7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,zui短可在上機前5分鐘再加入PI染色。 Annexin V : FITC Apoptosis Detection Kit I產(chǎn)品介紹: 細(xì)胞凋亡是在胚胎發(fā)育或組織更新維護(hù)過程中的出現(xiàn)的一種正常生理過程。細(xì)胞凋亡程序有顯著的形態(tài)學(xué)特征,包括質(zhì)膜不對性和吸附性的喪失,細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的皺縮,DNA核小體分裂。質(zhì)膜溶解是zui早出現(xiàn)的特征。在凋亡細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)會從磷脂雙層內(nèi)部轉(zhuǎn)移到外部,使PS暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。 Annexin V是一個分子量為35-36 kDa的Ca2+依賴型磷脂結(jié)合蛋白質(zhì),其對PS有高親和性,可以結(jié)合到暴露到質(zhì)膜外層的PS。Annexin V可以結(jié)合熒光染料,包括FITC。這種結(jié)合既保留了對PS的高親和性,同時可以作為靈敏探針,用流式細(xì)胞分析檢測鑒定正在凋亡的細(xì)胞。由于PS變化出現(xiàn)在細(xì)胞凋亡早期,F(xiàn)ITC Annexin V染色可以更早地鑒定出調(diào)亡細(xì)胞,比基于細(xì)胞核變化的檢測,例如DNA斷裂要早。 FITC標(biāo)記的 Annexin V 染色先于細(xì)胞凋亡或細(xì)胞壞死過程中伴隨產(chǎn)生的細(xì)胞膜完整性喪失的出現(xiàn)。因此,利用FITC標(biāo)記的Annexin V染色時通常結(jié)合活體染料如碘化丙啶(PI)或7-Amino-Actinomycin(7-AAD),方便研究者鑒定出早期凋亡細(xì)胞(PI陰性,F(xiàn)ITC Annexin V陽性)。具備完整細(xì)胞膜的活細(xì)胞可以阻止PI浸入,然而細(xì)胞膜壞死或破壞后就可以浸透PI。例如,活細(xì)胞檢測結(jié)果應(yīng)該是FITC Annexin V 陰性和 PI 陰性;早期凋亡細(xì)胞是FITC Annexin V 陽性 and PI 陰性;晚期凋亡細(xì)胞或已死亡細(xì)胞是FITC Annexin V 陽性和 PI陽性。此檢測不能區(qū)分出經(jīng)歷過凋亡的死細(xì)胞和經(jīng)歷其它壞死途徑的死細(xì)胞,因為二者都會同時被FITC Annexin V 和 PI染色。然而,持續(xù)觀察細(xì)胞凋亡都會經(jīng)歷三個階段:FITC Annexin V 和 PI 都是陰性(活細(xì)胞或沒有明顯細(xì)胞凋亡);Annexin V陽性 和 PI 陰性(凋亡早期,具有完整細(xì)胞膜);FITC Annexin V and PI 都是陽性(凋亡晚期或死亡)。經(jīng)歷這三個階段的細(xì)胞表明是經(jīng)歷細(xì)胞凋亡過程。相反,單一觀察顯示細(xì)胞FITC Annexin V和 PI都是陽性不能反映出細(xì)胞是否經(jīng)歷凋亡過程。 Annexin V : FITC Apoptosis Detection Kit I產(chǎn)品組份: Part A: 51-66121E, 10X Annexin V Binding Buffer, 50 ml Part B: 51-65874X, FITC Annexin V , 0.5 ml (1 ea), Vol. per Test: 5 μl Part C: 51-66211E, Propidium Iodide Staining Solution 2.0 ml (1 ea), Vol. per Test: 5 μl 重慶市華雅干細(xì)胞有限公司在倉庫備有BD Annexin V : FITC 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒I現(xiàn)貨,咨詢! |