康寧Corning NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝
康寧Corning NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝提供了NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增的全套材料和標(biāo)準(zhǔn)操作方法,所得NK細(xì)胞擴(kuò)增能力強(qiáng),活性和殺傷能力高。研究者無(wú)需優(yōu)化,而且使用步驟精簡(jiǎn)。和競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品比較了NK細(xì)胞產(chǎn)量,活力和NK 細(xì)胞體外 陽(yáng)性表達(dá)比率和殺傷能力。
產(chǎn)品訂購(gòu)信息 品牌 貨號(hào) 產(chǎn)品描述 包裝 Corning 88-570-kit NK細(xì)胞活化/擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝 1kit
康寧Corning NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝組成 NK細(xì)胞活化培養(yǎng)基 NK細(xì)胞活化添加劑 NK細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基 抗體預(yù)包被T75細(xì)胞培養(yǎng)瓶 細(xì)胞培養(yǎng)袋
康寧Corning NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝特色 擴(kuò)增能力強(qiáng),在14天內(nèi)可達(dá)到100倍擴(kuò)增 效應(yīng)細(xì)胞比例高,可達(dá)80% 操作方便
自然殺傷(NK)細(xì)胞是可識(shí)別和殺死腫瘤和病毒感染的關(guān)鍵免疫細(xì)胞。 NK細(xì)胞是當(dāng)今免疫-治療常用的細(xì)胞。但是NK細(xì)胞培養(yǎng)操作難度大,對(duì)培養(yǎng)條件、培養(yǎng)技術(shù)要求很高,難以獲得高純度高效能的活性細(xì)胞。過度免疫-治療所必需的離體NK細(xì)胞很難獲得。 已經(jīng)報(bào)道了幾種NK激活/擴(kuò)增方法,其使用擴(kuò)增介質(zhì)加各種細(xì)胞因子(例如IL-2,IL-7和IL-15)。 然而,這些需要研究人員的進(jìn)一步優(yōu)化。
Corning NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝NK細(xì)胞體外擴(kuò)增試劑盒包含預(yù)先涂覆的T-75燒瓶,50mL NK原代培養(yǎng)基,1.8mL NK Primary補(bǔ)充劑和1L NK擴(kuò)增培養(yǎng)基。 NK細(xì)胞體外擴(kuò)增試劑盒前三個(gè)組分是專為NK細(xì)胞激活設(shè)計(jì)的,而NK擴(kuò)增培養(yǎng)基用于NK細(xì)胞的擴(kuò)增。 NK初級(jí)培養(yǎng)基和NK膨脹培養(yǎng)基都使用高品質(zhì)試劑和cGMP級(jí)原料制造。 NK細(xì)胞體外擴(kuò)增試劑盒存在于培養(yǎng)基中的weiyi蛋白質(zhì)是血清白蛋白和重組人胰島-素的可注射水平。
Corning NK細(xì)胞活化/擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝由多個(gè)組分組成,為NK細(xì)胞培養(yǎng)提供簡(jiǎn)便的操作方案。使用Corning NK細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝所獲得細(xì)胞數(shù)量產(chǎn)量高,活性高,具有很高的殺傷效應(yīng)。
關(guān)于使用該試劑盒激活和擴(kuò)增的細(xì)胞的增殖率,免疫表型和CCK-8細(xì)胞毒性測(cè)試的信息,請(qǐng)參閱Corning應(yīng)用筆記使用康寧NK擴(kuò)增試劑盒(CLS-CG-AN-427)進(jìn)行人類天然殺傷細(xì)胞擴(kuò)增。
NK 細(xì)胞活化擴(kuò)增培養(yǎng)基套裝操作方法 1. 抗凝血室溫離心,400 xg,10min,上層血漿轉(zhuǎn)移到新管。 2. 熱滅活自體血漿,56°C,30min。離心, 800 xg , 20 min,去除沉淀。4°C 保存上清血漿,培養(yǎng)備用。 3. 加入等體積PBS(不含鈣鎂)替代被移除血漿保持體積不變,小心重懸血細(xì)胞。 注意:PBS預(yù)加0.1%人血清白蛋白(HSA)利于保持血細(xì)胞活性。 4. 使用淋巴細(xì)胞分離液從上面的血樣中制備PBMCs(人外周血單個(gè)核細(xì)胞)。 注意:使用新鮮采集的人血(2h內(nèi)采集)有利培養(yǎng),不要使用超過24h的血樣。 5. 至少5倍體積的PBS(不含鈣鎂)清洗PBMCs。室溫離心500xg,10min,收集PBMCs。 6. PBMCs稀釋到 1 x 106 cells/mL,使用NK活化培養(yǎng)基配比1.8mL NK活化添加劑和10%自體血漿。 7. 預(yù)包被T-75培養(yǎng)瓶使用前,用PBS(不含鈣鎂)清洗兩次。 8. 添加30 mL PBMC懸液到預(yù)包被T-75培養(yǎng)瓶,37°C,5% CO2培養(yǎng)。 注意:第六天之前,如果培養(yǎng)基變黃,細(xì)胞密度超過2.0 x 106 cells/mL,需要添加新鮮的NK活化培養(yǎng)基配比10%自體血漿,保持細(xì)胞密度大于 5 x 105 cells/mL。 9. 培養(yǎng)第六天,培養(yǎng)液離心,適量NK擴(kuò)增培養(yǎng)基(1000 IU/mL IL-2 和10%自體血漿)重懸細(xì)胞,再轉(zhuǎn)移到T-225培養(yǎng)瓶或透氣細(xì)胞培養(yǎng)袋。 10. 每隔兩三天,根據(jù)細(xì)胞擴(kuò)增狀態(tài),培養(yǎng)體系中添加新鮮的NK擴(kuò)增培養(yǎng)基(1000 IU/mL IL-2 和10%自體血漿)保持細(xì)胞密度在5 x 105到 2.0 x 106 cells/mL之間。 注意:NK擴(kuò)增階段,所加新鮮培養(yǎng)基自體血漿含量推薦范圍:0.5%-1%。 11. 培養(yǎng)14天左右,收獲NK細(xì)胞。 注意:整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中,細(xì)胞懸液吹打和培養(yǎng)容器拍打都要輕柔,以避免細(xì)胞損傷,保持細(xì)胞活性。
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